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溶解的主要问题是二级结构的形成。
虽然疏水肽链二级结构的形成更明显,但除最短的肽链外,此现象产生在几乎所有肽链,与极性无关。所以,溶解乐竞体育手机官网
的第一个原则是使用无菌蒸馏水或去离子水,当然无氧水最好。
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溶液可能遇到细菌降解。为防止此情况的发生,应溶解在无菌的蒸馏水中或用0.45或0.2孔径的滤膜过滤除菌。
含有 Cys、Met、Trp的乐竞体育手机官网
很容易氧化,应溶于无氧的水中。无氧水可通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气得到。
2.若乐竞体育手机官网
不溶于纯水,超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意:超声处理会引起溶液发热或乐竞体育手机官网
降解。
3.若乐竞体育手机官网
含有多个碱性乐竞体育授权
,使用(1-10%)的乙酸水溶液:对于疏水性强的乐竞体育手机官网
,应使用50%的乙酸。
4.若乐竞体育手机官网
中含有大量酸性乐竞体育授权
,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基吗啡或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。PH值在层析前必须调整。
5.异丙醇和乙腈能溶解中等大小的乐竞体育手机官网
。若肽要上柱,有机溶剂的量必须很少否则将严重影响停留时间。
6. 若乐竞体育手机官网
因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳炝链而高度疏水、或为中性肽时,DMF或DMSO等模变性剂的使用,有利于乐竞体育手机官网
的溶解。
a.高浓度模变性剂通过破坏乐竞体育手机官网
的二级结构而助溶。
b.膜变性剂适于乐竞体育手机官网
分析液的制备,但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰。
c.DMF是最佳变性剂(最高浓度可达30%),滴加至乐竞体育手机官网
溶解。
d.反相层析法时,DMF将与洗脱液前锋一起流出,根据入量的多少,峰值可能很高。大多数肽能在大量DMF流出后几分钟内流出,若肽链很小,洗脱太早,乐竞体育手机官网
的量将很低。