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乐竞体育手机官网 定制标记和修饰
目前乐竞体育手机官网 标记及修饰的内容非常多，广泛应用在乐竞体育手机官网 药物，乐竞体育手机官网 生物学，乐竞体育手机官网 抗体以及乐竞体育手机官网 试剂的研究中。目前应用广泛的有：非放射性核素标记（C13，H2，N15），荧光标记（FAM，FITC等），生物素标记，磷酸化修饰等。
1. 非放射性核素标记
目前在非放射性核素标记中，使用广泛的仍然是C13，H2，因为其使用安全，放射性小。现在有比较完全的非放射性标记的乐竞体育授权 ，可以按照正常的乐竞体育手机官网 合成方法将标记好的乐竞体育授权 直接连接到乐竞体育手机官网 上。
2. 荧光标记
荧光标记由于没有放射性，实验操作简单。因此，目前在生物学研究中荧光标记应用非常广泛，荧光标记方法与荧光试剂的结构有关系，对于有游离羧基的采用的方法与接肽反应相同，也采用HBTU/HOBt/DIEA方法连接。 在N端标记FITC的乐竞体育手机官网 需经历环化作用来形成荧光素，通常会伴有最后一个乐竞体育授权 的去除，但当有一个间隔器如氨基己酸，或者是通过非酸性环境将目的肽从树脂上切下来时，这种情况可避免。
3. 生物素标记
生物素-亲合素系统 (biotin-avidin system，BAS)，是70年代后期应用于免疫学，并得到迅速发展的一种新型生物反应放大系统。由于它具有生物素与亲合素之间高度亲和力及多级放大效应，并与荧光素、酶、同位素等免疫标记技术有机地结合，使各种示踪免疫分析的特异性和灵敏度进一步提高。主要有用于标记乐竞体育手机官网 氨基的生物素N-羟基丁二酰亚胺酯(BNHS)和生物素对硝基酚酯(pBNP)，其中以BNHS最常用，当然，也可以直接使用生物素也可以标记，因为其结构上有个游离的羧基，采用HBTU/HOBt/DIEA方法缩合，由于生物素的溶解度低，使用DMSO/DMF的混合溶剂增加溶解度。
4. 磷酸肽合成
磷酸肽在生命过程中发挥重要作用，磷酸化的位置在乐竞体育手机官网 上的Ser，Thr，Tyr。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化乐竞体育授权 ，目前使用的都是单苄基磷酸化乐竞体育授权 。磷酸化乐竞体育授权 的连接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法，但是目前采用该方法合成磷酸化也有缺点，特别是在合成多磷酸化乐竞体育手机官网 或长肽的时候，连接效率低，最后产品纯度很低，对于这种磷酸化乐竞体育手机官网 ，我们考虑采用后磷酸化方法，其合成过程就是在乐竞体育手机官网 合成结束后，选择性脱去要标记的乐竞体育授权 的侧链保护基，对于Tyr，Thr可以直接使用侧链不保护的乐竞体育授权 进行反应，而Ser可以采用Fmoc-Ser（trt），在1% TFA/DCM条件下可以定量的脱除。后磷酸化，采用双苄基亚磷酰胺，四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体，连接到羟基上，随后在过氧酸下氧化生成磷酰基，完成反应。
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